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細胞培養的RNA萃取 编辑

  • 傳統Trizol法

藥劑和器材编辑

實驗步驟编辑

1.抽掉medium,用冰PBS wash 2次 (若操作盤數過多時,可以暫時先不抽掉PBS)

2.10cm Dish約加入1c.c. Trizol,斜置Dish並用pipetman以畫圈方式打破細胞,收集至1.5 c.c. Tube。

3.加入200 ul chloroform,用手劇烈搖晃混合,此時呈現粉紅色。

4.靜置冰上30min,小心拿到離心機14000 rpm 離心15min(避免上下層液體混到)。

5.小心從離心機取出,抽取上層透明部份(此時上層透明為RNA,中間白色為DNA,下層粉紅色為protein),避免tip尖端碰到DNA和 protein層,一般約能夠抽到400~600ul左右。

6.加入等量isopropanol,上下翻轉tube,使其混合。

7.置入-20℃,置放45min以上也可以overnight。(萃取至少要做到這步才能休息)

8.再放到離心機14000 rpm 離心15min。

9.去除上清液,此時應該可以看到pellet。

10.Wash:加入1c.c. -20℃ 70% 酒精(最好使用高純度酒精,避免RNA degrade),vortex至pellet飄起。

11.再放到離心機14000 rpm 離心15min,並倒立風乾。


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