FANDOM


目的 编辑

目的:

1. 了解無菌操作的方式

2. 了解混濁度和活菌(E. coli)數目之間的關係

3. 瞭解如何做稀釋

原理 编辑

測量細菌的濃度 (cells/ml)

用混濁度﹑細菌數目和活菌數目來測定。

混濁度

其原理是可將細菌視為懸浮顆粒,這些顆粒可阻斷光線的通過,因此細菌濃度愈高,通過的光線愈少,就等於吸光值愈大,然而我們不認為它是吸光值,只是細菌將光線散射掉了,因此我們用混濁度表示﹔大多數時候我們是用LB來培養E. coli,因為LB的顏色是黃色,所以用分光光度計去測量細菌濃度時,波長選用600 nm﹔若是用minimal medium來培養E. coli,因為minimal medium的顏色是無色,所以用分光光度計去測量細菌濃度時,波長選用460 nm。用混濁度來測量細菌的濃度只是估計值,正確數目則需用下列方法決定之。

細菌數目

使用Petroff-Hauser Chamber在顯微鏡下數細菌的數目,在這Chamber內約有100格,每格的體積為10 ul﹔在使用此Chamber需要將此玻片的兩面清乾淨,尤其不能有任何的纖維殘留,因為纖維會將細菌和培養液分隔開而造成菌數分配不均,進而影響精確度。蓋玻片是否確實蓋好也是影響精確度的重要因子。

活菌數目

上一項的方法將死和活的細菌數目均計算在內,所以活的細菌數目是用一連續的稀釋菌液後,取0.1 ml的稀釋液塗抹在LB平板上等菌落長出後,數其菌落數,即可推出每ml的活菌數目。

實驗藥品 编辑

1.培養基(LB)

2.殺過菌的玻管

3.100 mM MgSO4溶液

4.細菌展開用的玻棒

5.37℃培養箱(incubator)

6.培養基平板


步驟 编辑

1.使用兩種(年輕和年老的)菌液,分別作1/2(年輕)和1/4(年老)的稀釋,先用分光光度計以600 nm波長去測量稀釋液的混濁度,並紀錄其值。

2.用此數據1 OD600= 1-3 X 108 cells/ml去推算約略所需要的稀釋度,以便在取用0.1 ml的稀釋液去塗抹在LB平板時,可得到菌落數為30-300個。

3.稀釋菌液用10 mM MgSO4溶液。

4.稀釋後用三種連續稀釋度,如10-1﹑10-2和10-3,取兩次0.1 ml的稀釋液分別去塗抹在LB平板(共6個LB平板),等到LB平板上所有的液體不見後,將平板倒置並放置於37 ℃培養箱,次日中午數菌落數。

5.比較從年輕和年老的菌液所得的菌數的差異。

您使用了广告屏蔽软件!


Wikia通过广告运营为用户提供免费的服务。我们对用户通过嵌入广告屏蔽软件访问网站进行了使用调整。

如果您使用了广告屏蔽软件,将无法使用我们的服务。请您移除广告屏蔽软件,以确保页面正常加载。

查看其他FANDOM

随机维基