Wikia生物學
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目的[ | ]

1. 如何正确及且准确地使用吸管(pipet)和微量吸管(pipetman)

2. 如何正确地使用分光光度计

3. 如何建立一个物质的吸收光谱(absorption spectrum)

4. 制作及使用一个标准曲线去决定未知溶液之浓度

原理[ | ]

所有物质都具有吸收和反射光的特性,不同的物质或同一物质存在于不同浓度的溶液中具有吸收和反射不同波长或不同程度的光。简单的说某种物体呈现某一颜色,即是这个物体反射代表此一颜色波长的光,而吸收了其馀波长的光。我们平常看到的绿色物体,即显示这个物体所反射的绿色光,而其馀波长的光被吸收了。

分光光度计在生物实验中,往往被用来决定溶液中是否含有某一特定物质及其浓度。其中的原理是每一原子,分子和化学键结均能吸收光,因此每一种物质含有不同的吸收光谱,譬如,胞密啶(cytosine)和鸟粪嘌呤(adenine)的化学构造不同,它们的吸收光谱亦不同,因此由鉴定吸收光谱的差异性可用来分辨不同的物质。其次用某一特定波长的光照射一溶液,由于溶液中的物质可吸收一部分的光,光被吸收的量和物质在溶液中的浓度成正比,由此可测定溶质在溶液中的浓度。

分光光度计

主要含有:光源,滤片,样品及光度侦测器四个部分。

光源,用来提供白光 [可见光的波长范围是从380到750 nm ( nanometer)],它是由许多不同波长的有色光所组成。此外光度计可用在可见光范围以外的光,包括紫外线和红外线,但需要特殊的光源来产生这种波长的光,这次的实验中只作可见光。

滤片,用来让不同波长的光通过。一个棱镜把可见光分成红橙黄绿篮靛紫等有色光,利用调整棱镜的角度,以便选用特定波长的光﹔或者利用不同颜色的滤片来让不同波长的光通过。

样品,置于一个装溶液的玻璃,石英或塑胶容器,叫做测定管(Cuvette),当测定管装了溶液即可放入光度计内的测定管置入样品槽,去量取吸光值。

光度侦测器(Photodetector),这个仪器可将光线转变成电流,其功用是侦测穿透光的强度,再由仪器上的仪表所显示其吸收或穿透值,这些值是由光度侦测器产生的电流量转化而来的。

刻度吸管

刻度吸管和微量吸管(pipetman)可以准确地量取微量的液体,因此如何正确地使用吸管去准确的量取液体,在现代生物学中是一个非常重要的实验技术。

注 :1公升=103毫升(ml)=106微升(ul)


标准曲线

(这是一个非常重要的定量方式)

用已知浓度的溶液,先做一连续的稀释,让这些稀释液的吸光殖在0.1到1.0之间(最好在0.1-0.5),在读取所有稀释浓度的吸光值后,用方格纸作浓度(X轴)对吸光值(Y轴)作图,所得的曲线即是标准曲线;对未知溶液一样地去读取吸光值(其值最好在0.1-0.5),利用这一个读值在标准曲线上去做交叉比对,就可以知道未知溶液的浓度,比如说, 未知溶液的吸光值是0.4,在标准曲线上所对应的浓度室0.38,未知溶液的浓度应是0.38 mg/ml(没有稀释的情形下)。


实验药品[ | ]

1.分光光度计(spectrophotometer)

2.刻度吸管(pipet)

3.安全吸球(safety bulb)

4.CoCl2

5.天平(balance)

6.水

7.微量吸管

8.tips

步骤[ | ]

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