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目的 编辑

1. 如何正確及且準確地使用吸管(pipet)和微量吸管(pipetman)

2. 如何正確地使用分光光度計

3. 如何建立一個物質的吸收光譜(absorption spectrum)

4. 製作及使用一個標準曲線去決定未知溶液之濃度

原理 编辑

所有物質都具有吸收和反射光的特性,不同的物質或同一物質存在於不同濃度的溶液中具有吸收和反射不同波長或不同程度的光。簡單的說某種物體呈現某一顏色,即是這個物體反射代表此一顏色波長的光,而吸收了其餘波長的光。我們平常看到的綠色物體,即顯示這個物體所反射的綠色光,而其餘波長的光被吸收了。

分光光度計在生物實驗中,往往被用來決定溶液中是否含有某一特定物質及其濃度。其中的原理是每一原子,分子和化學鍵結均能吸收光,因此每一種物質含有不同的吸收光譜,譬如,胞密啶(cytosine)和鳥糞嘌呤(adenine)的化學構造不同,它們的吸收光譜亦不同,因此由鑑定吸收光譜的差異性可用來分辨不同的物質。其次用某一特定波長的光照射一溶液,由於溶液中的物質可吸收一部分的光,光被吸收的量和物質在溶液中的濃度成正比,由此可測定溶質在溶液中的濃度。

分光光度計

主要含有:光源,濾片,樣品及光度偵測器四個部分。

光源,用來提供白光 [可見光的波長範圍是從380到750 nm ( nanometer)],它是由許多不同波長的有色光所組成。此外光度計可用在可見光範圍以外的光,包括紫外線和紅外線,但需要特殊的光源來產生這種波長的光,這次的實驗中只作可見光。

濾片,用來讓不同波長的光通過。一個稜鏡把可見光分成紅橙黃綠籃靛紫等有色光,利用調整稜鏡的角度,以便選用特定波長的光﹔或者利用不同顏色的濾片來讓不同波長的光通過。

樣品,置於一個裝溶液的玻璃,石英或塑膠容器,叫做測定管(Cuvette),當測定管裝了溶液即可放入光度計內的測定管置入樣品槽,去量取吸光值。

光度偵測器(Photodetector),這個儀器可將光線轉變成電流,其功用是偵測穿透光的強度,再由儀器上的儀表所顯示其吸收或穿透值,這些值是由光度偵測器產生的電流量轉化而來的。

刻度吸管

刻度吸管和微量吸管(pipetman)可以準確地量取微量的液體,因此如何正確地使用吸管去準確的量取液體,在現代生物學中是一個非常重要的實驗技術。

註 :1公升=103毫升(ml)=106微升(ul)


標準曲線

(這是一個非常重要的定量方式)

用已知濃度的溶液,先做一連續的稀釋,讓這些稀釋液的吸光殖在0.1到1.0之間(最好在0.1-0.5),在讀取所有稀釋濃度的吸光值後,用方格紙作濃度(X軸)對吸光值(Y軸)作圖,所得的曲線即是標準曲線;對未知溶液一樣地去讀取吸光值(其值最好在0.1-0.5),利用這一個讀值在標準曲線上去做交叉比對,就可以知道未知溶液的濃度,比如說, 未知溶液的吸光值是0.4,在標準曲線上所對應的濃度室0.38,未知溶液的濃度應是0.38 mg/ml(沒有稀釋的情形下)。


實驗藥品 编辑

1.分光光度計(spectrophotometer)

2.刻度吸管(pipet)

3.安全吸球(safety bulb)

4.CoCl2

5.天平(balance)

6.水

7.微量吸管

8.tips

步驟 编辑

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