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大腸桿菌勝任細胞之轉型作用
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大腸桿菌勝任細胞之轉型作用
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== 原理 == 轉化(transformation)是將異源DNA 分子引入另一細胞品系,使受 體細胞獲得新的遺傳性狀的一種手段,它是微生物遺傳、分子遺傳、 基因工程等研究領域的基本實驗技術。 轉化過程所用的受體細胞一般是限制-修飾系統缺陷的變異株, 即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變株,常用R-M-符號表示。受體 細胞經過一些特殊方法(如:電擊法、CaCl2、RuCl 等化學試劑法)的 處理後,細胞膜的通透性發生變化,成為能容許外源DNA 分子通過 的勝任細胞。在一定條件下,將外源DNA 分子與勝任細胞混合保溫, 使外源DNA 分子進入受體細胞。進入細胞的DNA 分子通過複製表達 實現遺傳信息的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。將經過轉化後 的細胞在選擇性培養基中培養即可篩選出轉化體(即帶有異源DNA分 子的受體細胞,transformant)。 本實驗以E. coli DH10B 菌株為體細胞,用CaCl2 處理受體菌使其 處於感受態,然後與pET-21b 質體共保溫,實現轉化。pET-21b 質體 攜帶有抗胺苄青黴素的基因,因而使接受了該質體的受體菌具有抗胺 苄青徽素的特性,常用Ampr 符號表示。將經過轉化的全部受體細胞 經過適當稀釋後,在含胺苄青黴素的平板培養基上培養,只有轉化體 才能存活,而未受轉化的受體細胞則因無抵抗苄青黴素的能力而死 亡。 轉化體經過進一步純化擴增後,可再將轉入的質體DNA 分離提 取出來,進行重複轉化、電泳、電子顯微鏡觀察及做限制性內切酶解 圖譜等實驗鑑定。
摘要:
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